雙光束紫外-可見分光光度計(jì)核查操作規(guī)程工作原理

　　紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進(jìn)行分析的一種儀器分析方法,。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價(jià)電子能級的躍遷,，它廣泛用于無機(jī)和有機(jī)物質(zhì)的定性和定量分析。

　　雙光束紫外-可見分光光度計(jì)朗伯一一比耳定律（Lambet -Beer）是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律,，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ),。當(dāng)入射光波長一定時(shí)，溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)厚度（吸收光程）的函數(shù),。其常用表達(dá)式如下（式中ε為系數(shù)）：

　　A=ε·c·l

　　雙光束紫外-可見分光光度計(jì)是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器,。根據(jù)光路設(shè)計(jì)的不同，紫外可見分光光度計(jì)可以分為單光束分光光度計(jì),、雙光束分光光度計(jì)和雙波長分光光度計(jì),。

　　1.2 適用范圍

　　雙光束紫外-可見分光光度計(jì)（以下簡稱儀器），系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開關(guān)（斬光器）分成為樣品和參比兩條光束結(jié)構(gòu)的儀器,。它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響,，并能自動記錄和掃描物質(zhì)的吸收光譜圖。儀器在開機(jī)后通常會做一些自檢,，但仍應(yīng)按本規(guī)程進(jìn)行檢定,。儀器的波長范圍包括195~800nm，狹縫為0.1~5nm可調(diào),。

　　1.3 制定依據(jù)

　　本規(guī)程主要參照國家計(jì)量檢定規(guī)程《JJG 178-2007紫外,、可見、近紅外分光光度計(jì)》,、《JJF 1641-2017紫外可見分光光度計(jì)型式評價(jià)大綱》及《中國藥典》2015年版四部指導(dǎo)通則0401紫外-可見分光光度法擬定,。

　　2.項(xiàng)目及技術(shù)要求

　　2.1 波長準(zhǔn)確度 ≤±1.0nm（紫外光區(qū)），≤±2.0nm（500nm附近）,；

　　 波長重復(fù)性 ≤0.5nm,。

　　2.2 基線平直度 ≤0.01 吸光度。

　　2.3 0%線噪聲 ≤0.1%,，100%線噪聲 ≤0.5%.

　　2.4 吸光度準(zhǔn)確度 應(yīng)符合規(guī)定,。

　　2.5 雜散光 <0.8%。

　　2.6 光譜帶寬 ≤標(biāo)示帶寬±20%,。

　　2.7 吸收池配對誤差 ≤0.5%,。

　　3 檢測條件

　　3.1 環(huán)境條件

　　3.1.1 室溫為10~30℃，相對濕度應(yīng)小于65%,。

　　3.1.2 工作臺不受陽光直射,，室內(nèi)應(yīng)無腐蝕性或其它影響測定的氣體干擾。

　　3.1.3 周圍應(yīng)無影響檢定的強(qiáng)電場,、磁場和震動,。

　　3.1.4 儀器檢定前，須先開機(jī)預(yù)熱半小時(shí),。馬弗爐

　　3.2 設(shè)備

　　鈥玻璃校正片,。

　　3.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑

　　氧化鈥（分析純）、高氯酸（分析純）、重鉻酸鉀（基準(zhǔn)品）,、硫酸（分析純）,、碘鈉（分析純）、亞硝酸鈉（分析純）,。

　　4 檢測方法

　　4.1 波長準(zhǔn)確度和波長重復(fù)性的檢測

　　4.1.1 用氧化鈥溶液的241.13,、278.10、287.18,、333.44,、345.47、361.31,、416.28,、451.30、485.29,、536.64和640.52nm的吸收值進(jìn)行檢定,。檢定時(shí)先配制4%氧化鈥的10%高氯酸溶液，將儀器波長設(shè)置為700~200nm范圍,，狹縫小于1nm,，以空氣為空白，調(diào)節(jié)透光率為100%,。取上述氧化鈥溶液,，置1cm石英吸收池中，放入樣品光路,，以適當(dāng)?shù)膾呙杷俣壤L制氧化鈥溶液的吸收圖譜并打印出峰值,，與規(guī)定值相比較。重復(fù)測定三次,，取平均值,，計(jì)算波長準(zhǔn)確度與重復(fù)性。

　　4.1.2 用鈥玻璃校正片代替氧化鈥溶液,，測定方法同上,，其尖銳吸收峰主要有279.4、287.5,、333.7,、360.9、418.5,、460.0,、484.5,、536.2和637.5nm,，校正片使用前必須經(jīng)過校正。

　　4.2 基線平直度的檢測

　　4.2.1 按儀器要求進(jìn)行基線校正后，調(diào)節(jié)狹縫2nm,，掃描速度中速,，取樣間隔1nm，樣品和參比光路均為空氣,。在儀器波長下限處加10nm,，波長上限處減50nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，測量圖譜中起始點(diǎn)的吸光度與圖譜中偏離起始點(diǎn)多的吸光度（即大偏離點(diǎn)）之差即為基線平直度,。

　　4.2.2 允許繪制的基線在更換光源或?yàn)V光片時(shí)微有跳動,，必要時(shí)可在檢定前再進(jìn)行一次基線校正。

　　4.3 0%線噪聲和100%線噪聲的測定

　　4.3.1 儀器設(shè)置為時(shí)間掃描方式,，波長設(shè)置為250nm,，狹縫1nm，樣品和參比光路均為空氣,，調(diào)整透光率為100%,，用適當(dāng)?shù)膾呙杷俣茸鰰r(shí)間掃描2分鐘，觀察100%線的變化,，然后再將擋光塊插入樣品光路,，觀察0%線的變化2分鐘，讀出各自峰的大（谷）值的差,，與規(guī)定值比較,。

　　4.3.2 儀器設(shè)置時(shí)間掃描方式，波長置500nm,，按上述方法測定500nm波長處的100%和0%線噪聲,。

　　4.3.3 如儀器無時(shí)間掃描方式，也可將儀器波長調(diào)至規(guī)定處,，用目視觀察2分鐘,，讀出各自峰的大（谷）值的差。

　　4.4 吸光度準(zhǔn)確度的檢測 將儀器波長設(shè)置于400~200nm,，狹縫1nm,，先用配對的吸收池均裝入0.005mol/L硫酸空白溶液，用合適的掃描速度記錄基線或自動校正基線,，然后再將樣品光路改變放0.006%重鉻酸鉀硫酸溶液0.005mol/L硫酸空白溶液,，掃描并打印峰谷值，計(jì)算吸收系數(shù),，重復(fù)測定三次,，取其平均值與規(guī)定的吸收系數(shù)許可范圍進(jìn)行比較，應(yīng)符合表中的規(guī)定,。

　　波長（nm）

　　235

　?。ㄐ,。?/p>

　　257

　　（大）

　　313

　?。ㄐ,。?/p>

　　350

　　（大）

　　吸收系數(shù)（百分吸收系數(shù)）的規(guī)定值

　　124.5

　　144.0

　　48.6

　　106.6

　　吸收系數(shù)（百分吸收系數(shù)）的許可范圍

　　123.0~126.0

　　142.8~146.2

　　47.0~50.3

　　105.5~108.5

　　4.5 雜散光的檢查

　　測定前應(yīng)將擋光塊插入樣品池,，校正儀器零點(diǎn),，其透光率應(yīng)為0.0%。按下表列的試劑和濃度,，配置成水溶液,，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率,，應(yīng)符合表中規(guī)定,。

　　試劑

　　濃度（%）

　　測定用波長（nm）

　　透光率（%）

　　碘鈉

　　1.00

　　220

　　<0.8%

　　亞硝酸鈉

　　5.00

　　340

　　<0.8%

　　4.6 光譜帶寬的測定

　　4.6.1 將儀器置于單光束能量測定方式，波長范圍置于660~650nm,，選擇小狹縫,，用合適的掃描速度進(jìn)行波長掃描，繪制氘燈譜線,，并使氘燈峰值為滿量程的三分之一,，測量氘峰的半峰寬即為小光譜帶寬，與規(guī)定值比較,。

　　4.6.2 沒有氘燈的儀器選擇汞燈546.1nm（或253.7nm）的特征譜線同4.6.1方法掃描并計(jì)算,。

　　4.7 吸收池配對誤差的檢測

　　4.7.1 取洗凈的石英吸收池盛滿水，在220nm處,，以其中一只透光率為100%,，再分別更換其它吸收池，測其透光率,，凡誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的,，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液，在350nm處,，以其中一只透光率為100%,，分別測定其它吸收池，凡透光率誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的即為配對的吸收池,。

　　4.7.2 取洗凈的玻璃吸收池盛滿水,，在660nm處，以其中一只透光率為100%,，再分別更換其它吸收池,，測其透光率，凡誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的,，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液,，在400nm處,，以其中一只透光率為100%，分別測定其它吸收池,，凡透光率誤差在規(guī)定范圍內(nèi)的即為配對的吸收池,。

　　4.7.3 由于吸收池在不同波長吸光度有少許改變,，在使用時(shí),，先測定配對誤差，必要時(shí)應(yīng)扣除,。

　　5 檢測結(jié)果處理

　　自檢結(jié)果全部符合技術(shù)要求者,，即為合格，可以使用,。若檢測結(jié)果不符合規(guī)定,，應(yīng)重新調(diào)試儀器再進(jìn)行自檢，符合規(guī)定后方可使用,。

　　6 檢驗(yàn)周期

　　應(yīng)至少每年檢測一次,，重要部件的維修和更換、變動放置地點(diǎn),、或?qū)x器性能有懷疑的,，應(yīng)按本規(guī)程隨時(shí)進(jìn)行自檢。