雙光束紫外-可見分光光度計核查操作規(guī)程工作原理

　　紫外可見分光光度法是利用物質分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進行分析的一種儀器分析方法,。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子能級的躍遷,，它廣泛用于無機和有機物質的定性和定量分析。

　　雙光束紫外-可見分光光度計朗伯一一比耳定律（Lambet -Beer）是光吸收的基本定律,，俗稱光吸收定律,，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎。當入射光波長一定時,，溶液的吸光度是吸光物質的濃度c及吸收介質厚度（吸收光程）的函數(shù),。其常用表達式如下（式中ε為系數(shù)）：

　　A=ε·c·l

　　雙光束紫外-可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設計的不同,，紫外可見分光光度計可以分為單光束分光光度計,、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。

　　1.2 適用范圍

　　雙光束紫外-可見分光光度計（以下簡稱儀器）,，系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開關（斬光器）分成為樣品和參比兩條光束結構的儀器,。它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響，并能自動記錄和掃描物質的吸收光譜圖,。儀器在開機后通常會做一些自檢,，但仍應按本規(guī)程進行檢定。儀器的波長范圍包括195~800nm,，狹縫為0.1~5nm可調,。

　　1.3 制定依據(jù)

　　本規(guī)程主要參照國家計量檢定規(guī)程《JJG 178-2007紫外、可見,、近紅外分光光度計》,、《JJF 1641-2017紫外可見分光光度計型式評價大綱》及《中國藥典》2015年版四部指導通則0401紫外-可見分光光度法擬定。

　　2.項目及技術要求

　　2.1 波長準確度 ≤±1.0nm（紫外光區(qū)）,，≤±2.0nm（500nm附近）,；

　　 波長重復性 ≤0.5nm。

　　2.2 基線平直度 ≤0.01 吸光度。

　　2.3 0%線噪聲 ≤0.1%,，100%線噪聲 ≤0.5%.

　　2.4 吸光度準確度 應符合規(guī)定,。

　　2.5 雜散光 <0.8%。

　　2.6 光譜帶寬 ≤標示帶寬±20%,。

　　2.7 吸收池配對誤差 ≤0.5%,。

　　3 檢測條件

　　3.1 環(huán)境條件

　　3.1.1 室溫為10~30℃，相對濕度應小于65%,。

　　3.1.2 工作臺不受陽光直射,，室內應無腐蝕性或其它影響測定的氣體干擾。

　　3.1.3 周圍應無影響檢定的強電場,、磁場和震動,。

　　3.1.4 儀器檢定前，須先開機預熱半小時,。馬弗爐

　　3.2 設備

　　鈥玻璃校正片,。

　　3.3 標準物質和試劑

　　氧化鈥（分析純）、高氯酸（分析純）,、重鉻酸鉀（基準品）,、硫酸（分析純）、碘鈉（分析純）,、亞硝酸鈉（分析純）。

　　4 檢測方法

　　4.1 波長準確度和波長重復性的檢測

　　4.1.1 用氧化鈥溶液的241.13,、278.10,、287.18、333.44,、345.47,、361.31、416.28,、451.30,、485.29、536.64和640.52nm的吸收值進行檢定,。檢定時先配制4%氧化鈥的10%高氯酸溶液,，將儀器波長設置為700~200nm范圍，狹縫小于1nm,，以空氣為空白,，調節(jié)透光率為100%。取上述氧化鈥溶液,，置1cm石英吸收池中,，放入樣品光路，以適當?shù)膾呙杷俣壤L制氧化鈥溶液的吸收圖譜并打印出峰值，與規(guī)定值相比較,。重復測定三次,，取平均值，計算波長準確度與重復性,。

　　4.1.2 用鈥玻璃校正片代替氧化鈥溶液,，測定方法同上，其尖銳吸收峰主要有279.4,、287.5,、333.7、360.9,、418.5,、460.0、484.5,、536.2和637.5nm,，校正片使用前必須經(jīng)過校正。

　　4.2 基線平直度的檢測

　　4.2.1 按儀器要求進行基線校正后,，調節(jié)狹縫2nm,，掃描速度中速，取樣間隔1nm,，樣品和參比光路均為空氣,。在儀器波長下限處加10nm，波長上限處減50nm范圍內進行掃描,，測量圖譜中起始點的吸光度與圖譜中偏離起始點多的吸光度（即大偏離點）之差即為基線平直度,。

　　4.2.2 允許繪制的基線在更換光源或濾光片時微有跳動，必要時可在檢定前再進行一次基線校正,。

　　4.3 0%線噪聲和100%線噪聲的測定

　　4.3.1 儀器設置為時間掃描方式,，波長設置為250nm，狹縫1nm,，樣品和參比光路均為空氣,，調整透光率為100%，用適當?shù)膾呙杷俣茸鰰r間掃描2分鐘,，觀察100%線的變化,，然后再將擋光塊插入樣品光路，觀察0%線的變化2分鐘,，讀出各自峰的大（谷）值的差,，與規(guī)定值比較。

　　4.3.2 儀器設置時間掃描方式,，波長置500nm,，按上述方法測定500nm波長處的100%和0%線噪聲,。

　　4.3.3 如儀器無時間掃描方式，也可將儀器波長調至規(guī)定處,，用目視觀察2分鐘,，讀出各自峰的大（谷）值的差。

　　4.4 吸光度準確度的檢測 將儀器波長設置于400~200nm,，狹縫1nm,，先用配對的吸收池均裝入0.005mol/L硫酸空白溶液，用合適的掃描速度記錄基線或自動校正基線,，然后再將樣品光路改變放0.006%重鉻酸鉀硫酸溶液0.005mol/L硫酸空白溶液,，掃描并打印峰谷值，計算吸收系數(shù),，重復測定三次,，取其平均值與規(guī)定的吸收系數(shù)許可范圍進行比較，應符合表中的規(guī)定,。

　　波長（nm）

　　235

　?。ㄐ。?/p>

　　257

　?。ù螅?/p>

　　313

　?。ㄐ。?/p>

　　350

　?。ù螅?/p>

　　吸收系數(shù)（百分吸收系數(shù)）的規(guī)定值

　　124.5

　　144.0

　　48.6

　　106.6

　　吸收系數(shù)（百分吸收系數(shù)）的許可范圍

　　123.0~126.0

　　142.8~146.2

　　47.0~50.3

　　105.5~108.5

　　4.5 雜散光的檢查

　　測定前應將擋光塊插入樣品池,，校正儀器零點，其透光率應為0.0%,。按下表列的試劑和濃度,，配置成水溶液，置1cm石英吸收池中,，在規(guī)定的波長處測定透光率，應符合表中規(guī)定,。

　　試劑

　　濃度（%）

　　測定用波長（nm）

　　透光率（%）

　　碘鈉

　　1.00

　　220

　　<0.8%

　　亞硝酸鈉

　　5.00

　　340

　　<0.8%

　　4.6 光譜帶寬的測定

　　4.6.1 將儀器置于單光束能量測定方式,，波長范圍置于660~650nm，選擇小狹縫,，用合適的掃描速度進行波長掃描,，繪制氘燈譜線，并使氘燈峰值為滿量程的三分之一,，測量氘峰的半峰寬即為小光譜帶寬,，與規(guī)定值比較。

　　4.6.2 沒有氘燈的儀器選擇汞燈546.1nm（或253.7nm）的特征譜線同4.6.1方法掃描并計算,。

　　4.7 吸收池配對誤差的檢測

　　4.7.1 取洗凈的石英吸收池盛滿水,，在220nm處,，以其中一只透光率為100%，再分別更換其它吸收池,，測其透光率,，凡誤差在規(guī)定范圍內的，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液,，在350nm處,，以其中一只透光率為100%，分別測定其它吸收池,，凡透光率誤差在規(guī)定范圍內的即為配對的吸收池,。

　　4.7.2 取洗凈的玻璃吸收池盛滿水，在660nm處,，以其中一只透光率為100%,，再分別更換其它吸收池，測其透光率,，凡誤差在規(guī)定范圍內的,，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液，在400nm處,，以其中一只透光率為100%,，分別測定其它吸收池，凡透光率誤差在規(guī)定范圍內的即為配對的吸收池,。

　　4.7.3 由于吸收池在不同波長吸光度有少許改變,，在使用時，先測定配對誤差,，必要時應扣除,。

　　5 檢測結果處理

　　自檢結果全部符合技術要求者，即為合格,，可以使用,。若檢測結果不符合規(guī)定，應重新調試儀器再進行自檢,，符合規(guī)定后方可使用,。

　　6 檢驗周期

　　應至少每年檢測一次，重要部件的維修和更換,、變動放置地點,、或對儀器性能有懷疑的，應按本規(guī)程隨時進行自檢,。